本文標(biāo)題："糖元混合液沉淀化石樣品分析圖像顯微鏡廠家"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類(lèi): 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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糖元混合液沉淀化石樣品分析圖像顯微鏡廠家
上清液再用等體積的酚、氯仿、異戊醇(體積比為25：24：”抽提一次
，抽提過(guò)程中要翻轉(zhuǎn)試管幾次以混勻液體。值得注意的是，熱的提取溶液
會(huì)導(dǎo)致有機(jī)溶液蒸發(fā)而增加試管內(nèi)的壓力，并導(dǎo)致試管沖開(kāi)。然后在常溫
下10000g離心5分鐘以分離水相和有機(jī)相，將水相轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的試管內(nèi)。
在大多數(shù)情況下，水相會(huì)在上層，但是在鹽存在的情況下，分層會(huì)顛倒。
因此研究者需要分清水相和有機(jī)相后，再棄去有機(jī)廢液。可加幾滴酚到可
疑的有機(jī)相中，如果酚進(jìn)入溶液中，證明是有機(jī)相，如果分離則是水相。
再用等體積的氯仿、異戊醇(體積比為24：])抽提一次，翻轉(zhuǎn)試管幾次，離
心，轉(zhuǎn)移上清液到新的試管內(nèi)。在沉淀過(guò)程中，可加不含DNA的糖元(1訓(xùn)1m
g／m，溶液)作為DNA的載體。加一倍體積的異丙醇，翻轉(zhuǎn)混勻，于—20~(2
過(guò)夜，以沉淀DNA。DNA／糖元混合液在室溫下10000g離心30分鐘，去掉上
清液，沉淀用]m，70％的乙醇洗兩次后，離心，去掉上清液。這一步操作
要特別注意，因?yàn)槌恋碛锌赡軟](méi)有沉在管壁，而在沖洗的過(guò)程中被丟棄。
沉淀經(jīng)過(guò)真空干燥(5分鐘)，或者在空氣中自然干燥，然后溶于100山的]／
10XTE緩沖液中(1 mMTrisHCI，0．0]mMEDTA，pH8．0)。
沉淀可能由于含有褐色雜質(zhì)而呈深色，這不足為怪；要注意的是，當(dāng)
用瓊脂糖電泳來(lái)觀察DNA片段大小時(shí)，在紫外光下不想要的共沉淀物會(huì)發(fā)出
藍(lán)色熒光。因?yàn)檫@些化合物可能會(huì)影響酶的擴(kuò)增，因此許多抽提后的純化
方法可以去掉這些雜質(zhì)。含有雜質(zhì)的DNA溶液可以通過(guò)硅膠樹(shù)脂柱(Qiagen)
或者與樹(shù)脂漿混合(PromegaWizard純化系統(tǒng)或者Bio101 Gene純化系統(tǒng))，
而將雜質(zhì)從樹(shù)脂柱上洗掉，或者在溶液當(dāng)中就被移走。通過(guò)改變洗脫液而
將DNA再次釋放出來(lái)。
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